Expérience : Action des UV sur la levure Ade2
On connaît les UV pour leur capacité à brunir la couleur de peau. Mais les UV sont ils un agent mutagène ? Nous allons montrer ce qu'il se passe lorsque des levures Ade2 sont exposées sous un lampe à UV.
But de l'expérience :
Montrer que les UV sont des agents mutagènes.
Matériel :
- Boîte de pétri initiale notée "Y"
- Boîtes de pétri
- Tubes stériles
- Cures-dent
- Pipettes de 10 mL
- Microscopes
- Lampe à UV
- Cupules de comptage
- Eau stérile
- Eau de javel
- Alcool à 70 ou 90 degrès
Protocole :
Important : Toutes les manipulations seront effectuées dans des conditions de stérilité, c'est à dire prêt d'un bec-bunsen et sur un paillasse préalablement nettoyée à l'eau de javel. Les mains seront nettoyées aussi avec de l'alcool 70°.
Préparation de la solution mère :
- Mettre 10 mL d'eau stérile dans un tube stéril de 10 mL
- Prélever quelques colonies Ade2 à l'aide d'un cure-dent
- Les mettre dans les tubes de 10 mL
- Agiter jusqu'à ce que la soution soit trouble.
- Noter « Suspension mère » à l'aide d'un stylo / feutre
Préparation de la suspension de comptage :
- Prélever 0,5 mL de la solution mère et la mettre dans un tube stérile de 10 mL
- Ajouter 4,5 d'eau stérile
- Agiter et noter suspension de comptage
Comptage :
- Prélever une goutte de la suspension de comptage
- La déposer dans un coin d'une cupule à comptage
- Compter à l'aide d'un microscope optique
- Faire une moyenne
- multiplier par 100 000 pour obtenir la concentration de la suspension de comptage
- multiplier par 10 pour obtenir la concentration de la solution mère
- Si le résultat est supérieur à 10 000 000 de cellules par mL, alors il n'y a aucune erreur
Préparation de la suspension A : 106 cellules / mL
- Prélever le volume V de la suspension mère : V = 50 000 000 / Csolution mère
- Verser dans un tube de 50 mL
- Compléter avec Veau stérile = 50 – Vsolution mère ( en mL )
- Noter « suspension A »
- Répartir dans un tube de 5 mL
Préparation de la suspension B : 105 cellules / mL
Si nous gardons une même suspension pour l'étalage des boîtes de pétri, nous nous attendons à avoir trop de cellules rendant le comptage impossible. Alors on fait une suspension B spécialement pour les boîtes de comptage avec une concentration inférieure.
- Prélever 10 mL de la suspension A
- Les mettres dans un flacon de 100 mL et compéter avec 90 mL
- Noter « suspension B »
Répartition sur les boîtes de pétri :
- Travailler en milieu stérile, pour ça, se placer dans un rayon de 30 cm autour de la flamme bleue d'un bec-bunsen.
- Préparer deux boîtes témoins I0 ( irradiation 0 ).
- Ouvrir les boîtes de pétri, puis avec le compte goutte, verser 0,1 ml ( deux gouttes de la solution B ) sur la gélose puis étaler immédiatement avec l'étaleur stérile en effectuant un mouvement circulaire et répété afin de répandre la solution sur l'ensemble du milieu ( ne pas appuyer trop fort ).
- refermer immédiatement la boîte.
- Noter à l'aide d'un feutre I0.
- Préparer 12 boîtes de chaque type ( I15, I30, I60, et I120 )
- Avec un autre compte-goutte, disposer 0,1 mL de la solution A, préalablement agitée, sur les boîtes de pétri puis étaler à l'aide de l'étaleur stérile.
- Noter les boîtes en fonction du temps d'irradiation ( I15 etc ... ) en secondes.
- Ranger les instruments et nettoyer le matériel avec l'eau de javel
- Nettoyer mains et paillasse à l'eau alcoolisée et éteindre le bec-bunsen
- procéder à l'irradiation en respectant le temps
- déposer les boîtes pendant 7 jours dans une étuve.
Voici les boîtes que nous avons traité : 70 en tout !
Nous travaillions tout le temps près d'un bec-bunsen pour rester dans des conditions stériles.
Les boîtes sont mises dans l'étuve pendant environ 7 jours.
70 boîtes à compter, 1500 petits points pour certaines ...
Interprétation :
Résultats de l'expérience
On remarque que plus les colonies de levures sont exposées aux rayonnements des UV, moins il y a de levures ; comme le montre le graphique ci-dessous.
On remarque aussi que le pourcentage de levures mutées augmente en fonction du temps d'exposition.
Conclusion :
Les boîtes de pétri de plus en plus exposées aux UV voient leur pourcentage de cellules mutées augmenter. Et les boîtes de pétri non-exposées ne contiennent pas du tout de cellules mutées; On peut donc en conclure que les UV sont agent mutagène.
